作者：CACLP
50年代，美國(guó)W.H.Coulter在世界上研發(fā)了第一臺(tái)血液分析儀Automated hematology analyzer(AHA)。現(xiàn)代血液分析儀按功能可分為：全血細(xì)胞計(jì)數(shù)、白細(xì)胞分類、血細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類功能的擴(kuò)展。
一、檢測(cè)原理及技術(shù)
①電阻抗法原理
②儀器的組成和功能
信號(hào)發(fā)生器
放大器
閾值調(diào)節(jié)器
甄別器
整形器
計(jì)數(shù)器
放大→閾值調(diào)節(jié)→甄別→整形→計(jì)數(shù)
③電阻抗原理進(jìn)行血細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類原理圖（見下）
特點(diǎn)：是最早的血細(xì)胞計(jì)數(shù)理論
缺點(diǎn)：不能對(duì)單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行系統(tǒng)分析，得出的參數(shù)為群體平均值。
射頻指射頻電流，是每秒變化大于10000次的高頻交流電磁波。電導(dǎo)性即電的傳送性能。高頻電流能通過(guò)細(xì)胞壁,滲入細(xì)胞膜脂質(zhì)層可測(cè)定細(xì)胞的導(dǎo)電性，提供細(xì)胞內(nèi)部化學(xué)成分、細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)、顆粒成分等特征性信息。
用途：特別有助于鑒別體積雖相同、但內(nèi)部結(jié)構(gòu)性質(zhì)不同的細(xì)胞（或相似體積的顆粒）。
激光散射法
①原理：處理細(xì)胞（稀釋、染色、球形化）→ 通過(guò)石英毛細(xì)管（激光束照射）→ 細(xì)胞產(chǎn)生與其特征相應(yīng)的各種角度的散射光 → 周圍有不同角度的信號(hào)檢測(cè)器
不同結(jié)果角度代表的意義如下：
前向散射光（FSC）:數(shù)量和表面體積大小
側(cè)向散射光（SSC）:顆粒、細(xì)胞核等復(fù)雜性
散射熒光（FL）:FL1綠色，F(xiàn)L2橘紅色，F(xiàn)L3紅色
激光散射法是現(xiàn)代五分類血液分析儀的主要檢測(cè)原理之一。
②基本組成
光源：氣體激光（氦-氖、氬氣等）、固體激光（半導(dǎo)體）、鎢光源（多色光）
鞘流：維持顆粒于液流中央，順序、單個(gè)、恒速向前流動(dòng)，即流體動(dòng)力學(xué)聚焦
細(xì)胞懸液：被檢測(cè)細(xì)胞（顆粒）的懸液，由氣壓導(dǎo)入流動(dòng)池
光檢測(cè)器：接受來(lái)自各種角度的散射光或吸收光信號(hào)，并轉(zhuǎn)換成相應(yīng)特征的電信號(hào)
功能水平上對(duì)單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行定量分析，可高速分析上萬(wàn)個(gè)細(xì)胞，并能同時(shí)從一個(gè)細(xì)胞中測(cè)得多個(gè)參數(shù)，是最先進(jìn)的細(xì)胞定量分析技術(shù)。
③網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測(cè)原理
利用流式細(xì)胞儀（flow cytometer,FCM）的方法進(jìn)行網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)。因網(wǎng)織紅細(xì)胞的胞質(zhì)中尚殘留RNA,可與丫啶橙、哌若寧-Y、噻唑橙等染料結(jié)合，應(yīng)用FCM測(cè)量發(fā)出的特定顏色熒光，進(jìn)行RNA定量。
分光光度法
①原理：遵循Lambert-Beer比色定律，即吸光度A與液體物質(zhì)濃度C成正比。
②組成：?jiǎn)紊庠础z測(cè)池和比色容器、光檢測(cè)器。
③血紅蛋白測(cè)定：溶血?jiǎng)?紅細(xì)胞溶解 → Hb → 與溶血?jiǎng)┲心承┏煞纸Y(jié)合 → 穩(wěn)定的血紅蛋白衍生物 → 530～550nm → 比色。
血液分析儀常用檢驗(yàn)參數(shù)的原理和技術(shù)
白細(xì)胞五分類計(jì)數(shù)及相關(guān)參數(shù)檢測(cè)
①過(guò)氧化物酶（peroxidase）染色通道檢測(cè)原理
②體積、電導(dǎo)和光散射（VCS）法
VCS：Volume，Conductivity，lightScatter
電阻抗技術(shù) →細(xì)胞體積、數(shù)量
電導(dǎo)技術(shù)→ 內(nèi)部結(jié)構(gòu)性質(zhì)不同的細(xì)胞
光散射技術(shù) →細(xì)胞內(nèi)的顆粒性、核分葉性、核表面結(jié)構(gòu)
VCS技術(shù)下各種白細(xì)胞群的特征
③多角度偏振光散射法（MAPSS）
血標(biāo)本經(jīng)鞘液稀釋后→WBC近似自然狀態(tài)→Hb溢出，鞘流水分子則進(jìn)入RBC →不干擾白細(xì)胞檢測(cè)→多角度偏振光散射法分4個(gè)角度檢測(cè)
0°：反映細(xì)胞大小，同時(shí)檢測(cè)細(xì)胞數(shù)量
7°：反映細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)及核染色質(zhì)的復(fù)雜性。
90°：反映細(xì)胞內(nèi)部顆粒及分葉狀況。
90°D：在光散射過(guò)程中，嗜酸性粒細(xì)胞顆粒豐富，可去偏振光，與中性粒細(xì)胞鑒別。
優(yōu)點(diǎn)：可鑒別白細(xì)胞亞群、異常細(xì)胞類型；白細(xì)胞分類不受有核紅細(xì)胞、血小板凝聚、不溶解紅細(xì)胞和細(xì)胞碎片等干擾物質(zhì)影響。
成熟紅細(xì)胞系列參數(shù)檢測(cè)原理
電阻抗法
流式細(xì)胞術(shù)、鞘流電阻抗法
流式細(xì)胞術(shù)激光散射法
電阻抗法和光散射法
血小板系列參數(shù)檢測(cè)原理
電阻抗法
流式細(xì)胞激光核酸熒光染色和電阻抗法
激光散射法
固體激光散射法、電阻抗法和單克隆抗體熒光染色散射法
網(wǎng)織紅細(xì)胞系列參數(shù)檢測(cè)原理
非熒光染料染色法：新亞甲藍(lán)
熒光染料染色法：噁嗪、堿性槐黃O、聚次甲基、噻唑橙、氧氮雜芑750等。
有核紅細(xì)胞系列參數(shù)檢測(cè)原理
VCS法
流式激光/熒光染色法
白細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類通道衍生法
阻抗法和噻唑橙熒光染色流式細(xì)胞術(shù)
二、結(jié)果顯示
血細(xì)胞直方圖:
即細(xì)胞體積分布圖形，橫坐標(biāo)為細(xì)胞體積大小，縱坐標(biāo)為一定體積的細(xì)胞數(shù)目。
①白細(xì)胞直方圖
②紅細(xì)胞直方圖
③血小板直方圖
散點(diǎn)圖：
平面散點(diǎn)圖只顯示2維（X、Y軸）圖像，在坐標(biāo)系，X軸和Y軸分別表示一種檢測(cè)原理或檢測(cè)角度的細(xì)胞信息，在坐標(biāo)象限中的任何一個(gè)散點(diǎn)反映的就是X軸和Y軸的綜合信息。
在不同的檢測(cè)原理下，坐標(biāo)上散點(diǎn)的位置如：上下（高低）、左右、前后（可重疊）或散點(diǎn)群的疏密，均與相應(yīng)類別的細(xì)胞外形、體積大小、內(nèi)部結(jié)構(gòu)、胞核胞質(zhì)、顆粒數(shù)量等理化特性密切相關(guān)。
異常散點(diǎn)圖包括病理性和非病理性干擾物質(zhì)的影響，散點(diǎn)圖需要結(jié)合臨床和檢驗(yàn)分析前、中、后仔細(xì)分析，作出合理的解釋。
紅細(xì)胞參數(shù)
①紅細(xì)胞體積分布紅細(xì)胞參數(shù)寬度（RDW）
②紅細(xì)胞血紅蛋白分布寬度（HDW）
HDW反映紅細(xì)胞內(nèi)HGB含量異質(zhì)性的參數(shù)，HDW和RDW明顯增高，見于遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥，屬于小細(xì)胞不均一性高色素性貧血。HDW對(duì)鐮形細(xì)胞貧血、β-輕型珠蛋白生成障礙性貧血也有一定診斷意義。
③有核紅細(xì)胞（NRBC）
新生兒、胎兒可見，健康成人不見
網(wǎng)織紅細(xì)胞參數(shù)
①未成熟網(wǎng)織紅細(xì)胞比率IRF
概念：是指幼稚的或未成熟的網(wǎng)織紅細(xì)（即含高RNA的網(wǎng)織紅細(xì)胞）與總的網(wǎng)織 紅細(xì)胞的比值，既IRF= （MFR+HFR）/（LFR+MFR+HFR)
意義：骨髓抑制時(shí)，HFR、MFR減低（IFR）早于LFR、N、PLT；恢復(fù)時(shí)HFR、MFR （IFR）迅速增高。
②網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟指數(shù)RMI
公式：RMI=（MFR+HFR)/LFR
評(píng)價(jià)：增高：常見于溶血性貧血、特發(fā)性血小板減少性紫癜、白血病、真性紅細(xì)胞增多癥和多發(fā)性骨髓瘤。
減低：常見于與骨髓衰竭或無(wú)效造血有關(guān)，如巨幼細(xì)胞性貧血、再生障礙性貧血。
③網(wǎng)織紅細(xì)胞血紅蛋白量RET-He
概念：指網(wǎng)織紅細(xì)胞內(nèi)血紅蛋白的含量
公式：CHr=MRV × CHCMr
評(píng)價(jià)：反映網(wǎng)織紅細(xì)胞的質(zhì)量變化，Ret-He達(dá)30.5pg為患者需要補(bǔ)充鐵的最佳臨界值，其靈敏度和特異性高，與CHr有很好的相關(guān)性。
④網(wǎng)織紅細(xì)胞平均血紅蛋白量CHr
概念：平均每個(gè)網(wǎng)織紅細(xì)胞所含血紅蛋白的量
公式：CHr=MRV × CHCMr，單位：pg
評(píng)價(jià)：反映網(wǎng)織紅細(xì)胞內(nèi)的鐵含量，可實(shí)時(shí)評(píng)價(jià)骨髓紅系的功能狀態(tài)。
白細(xì)胞參數(shù)
①中間細(xì)胞群
MID是三分群血液分析儀指標(biāo)，一般包括正常時(shí)的Mon、E、B；病理時(shí)的各種原始幼稚細(xì)胞、異型淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞等。MID計(jì)數(shù)異?；驁?bào)警，需特別注意進(jìn)行血涂片復(fù)查。由于各種儀器使用的稀釋液和溶血?jiǎng)┌准?xì)胞膜作用不一，因此，中間細(xì)胞群的確切細(xì)胞組成并不明確。
②未成熟粒細(xì)胞
IG主要包括St、早幼粒細(xì)胞、中幼粒細(xì)胞、晚幼粒細(xì)胞，但不包括原始粒細(xì)胞。有助于篩檢、監(jiān)測(cè)白血病反應(yīng)、嚴(yán)重或慢性感染、炎癥、腫瘤、MDS、組織壞死。血培養(yǎng)陽(yáng)性、IG%高于血培養(yǎng)陰性者，但靈敏度尚不足以用于預(yù)測(cè)感染或菌血癥，IG超過(guò)3%，對(duì)指示敗血癥非常特異，有助于微生物檢測(cè)評(píng)價(jià)。
③造血祖細(xì)胞
HPC是反映以CD34陽(yáng)性的造血祖細(xì)胞為主的參數(shù)，特別適合于外周造血干細(xì)胞移植過(guò)程，監(jiān)測(cè)供體在接受藥物作用后外周血中造血干細(xì)胞的變化，便于選擇采集時(shí)機(jī)。