摘要：按照GMP 要求，制定清潔分析方法驗證方案，通過對化學(xué)殘留物檢測分析方法驗證，確認可適用于清潔驗證的分析方法。關(guān)鍵詞：GMP 化學(xué)殘留物清潔分析方法驗證
在制藥工業(yè)生產(chǎn)中，一條生產(chǎn)線往往能生產(chǎn)幾個產(chǎn)品或原料藥，
因此現(xiàn)版GMP 要求在藥品生產(chǎn)過程中必須對生產(chǎn)設(shè)備進行有效的清潔，以防止本產(chǎn)品對后續(xù)生產(chǎn)的產(chǎn)品造成化學(xué)物質(zhì)或微生物的污染，倍值在工作曲線上對應(yīng)的待測物濃度即為估算的檢出限。
2.1.2非儀器分析中的方法：
用已知濃度的被測物，試驗出其能被可靠地檢測出的最低濃度或量。
從而而影響了后續(xù)產(chǎn)品的質(zhì)量和安全性。為了能有效的檢測出設(shè)備中的化學(xué)殘留物，應(yīng)使用經(jīng)驗證的、檢出靈敏度高的檢驗方法來檢測污染物，即進行清潔分析方法驗證。
通常清潔分析方法驗證包括：取樣方法驗證和檢驗方法驗證。
一、取樣方法驗證包括
1.棉簽取樣方法驗證
取樣過程需要驗證，通過回收率實驗驗證取樣過程的回收率和重現(xiàn)性，通常取樣回收率和檢驗方法回收率結(jié)合進行，總回收率一般不低于70%，RSD不大于20%。
驗證方法如下：
1.1準(zhǔn)備一塊與設(shè)備表面相同的材質(zhì)。1.2在鋼板上劃出10*10CM的區(qū)域。
1.3將20倍限度量的待檢測物溶液，定量裝入經(jīng)校驗注射器。1.4其溶液均勻涂抹在10*10CM的區(qū)域內(nèi)。1.5自然干燥或電吹風(fēng)溫和干燥。
1.6用選定的擦拭溶劑潤濕棉簽左右或上下前進式進行擦拭。1.7將擦拭棉簽放入棉簽管中，加入預(yù)定溶劑5ml，超聲萃取。1.8用經(jīng)驗證的檢驗方法，計算回收率和回收率的RSD。
2.淋洗的取樣方法根據(jù)管路設(shè)計，選擇淋洗線路下游或最低點的幾個取樣口，分別按照微生物取樣和化學(xué)取樣規(guī)程在最后一步淋洗近結(jié)束時取樣。淋洗法樣品可對沖洗液直接檢測也可以對沖洗液稀釋后檢測，無論是直接檢測還是稀釋后檢測都應(yīng)在接到樣品后先將樣品同空白溶劑做視覺檢查，確定是否有顏色差異和異物存在。如果有上述現(xiàn)象發(fā)生，直接判為不合格。
通常淋洗液方法不做回收率驗證，定量檢查做回收率驗證，可以用淋洗溶劑沖洗已知量的分析物回收率，回收率通常不低于95%。
二、清潔檢驗分析方法驗證
用于清潔驗證的分析方法，其驗證的原理和一般的方法驗證相同。清潔驗證中的分析對象是殘留物，驗證中所用的分析方法一般與雜質(zhì)的定量實驗相仿，要求就專屬性、檢測限、定量限、線性和范圍、精密度、準(zhǔn)確度進行驗證。
1.專屬性
專屬性要求同條件下用空白溶劑、空白棉簽溶液、空白棉簽加待分析殘留物樣品溶液，待分析殘留物樣品溶液各進樣證明本方法不存在干擾，或者干擾可用適當(dāng)?shù)姆椒ㄏ簟?/p>
2.檢測限（LOD ）和定量限（LOQ ）
在常規(guī)的原料藥分析中，LOD值和LOQ 值一般并不重要，因為被測物的量一般要遠遠大于LOQ。但在清潔驗證中就不同了，因為其分析的目的就是要確定痕量的殘留物，所以這兩個值是清潔驗證中非常關(guān)心的。
2.1檢測限（LOD ）
傳統(tǒng)的方法是信噪比法，通常LOD 是指信噪比為3:1時的被分析物濃度。其驗證方法如下：
2.1.1儀器分析中的方法：
方法一：把已知低濃度供試品溶液和空白溶液分別重復(fù)測定六次，計算測得信號的平均值與信噪比，以信噪比為3：1時的相應(yīng)濃度或注入儀器的量定為檢出限。
方法二：平行測量空白六次，計算背景響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)偏差，其3
248中國化工貿(mào)易China Chemical Trade 2.2定量限（LOQ ）
LOQ 是指信噪比為10:1時的被分析物濃度.LOQ是符合一定的精密度和線性要求的最低濃度。其驗證方法如下：
2.2.1儀器分析中的方法：
方法一：把已知低濃度供試品溶液分別重復(fù)測定六次，計算測得信號的平均值與信噪比，以信噪比為10：1時的相應(yīng)濃度或注入儀器的量定為檢出限。
方法二：平行測量空白六次，計算背景響應(yīng)值得標(biāo)準(zhǔn)偏差，其10倍值在工作曲線上對應(yīng)的待測物濃度即為估算的定量限。
2.2.2非儀器分析中的方法：
用已知濃度的被測物，試驗出其能以較好的準(zhǔn)確度和精密度檢測出的最低濃度或量。
3.線性/范圍3.1線性
線性系指在設(shè)計范圍內(nèi)，測定結(jié)果與試樣中被測物濃度呈正比關(guān)系的程度。測量方法簡述：在規(guī)定的范圍內(nèi)，以系列樣品測得的結(jié)果和被測物濃度進行函數(shù)作圖，再用最小二乘法進行線性回歸。必要時，測試結(jié)果可經(jīng)數(shù)學(xué)轉(zhuǎn)換，再進行線性回歸計算，應(yīng)列出回歸方程、線性相關(guān)系數(shù)。線性的相關(guān)系數(shù)應(yīng)不低于0.99，濃度范圍應(yīng)達到殘留物限度的50%~150%。
3.2范圍
范圍系指能達到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性，測試方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間。測量方法簡述：通過實驗驗證來證明不論被測物濃度是在接近檢測范圍邊緣還是在檢測范圍內(nèi)，都能被準(zhǔn)確、精密和線性良好地檢測的濃度范圍。定量檢查應(yīng)至少測試5個濃度的范圍并且包含清潔的最低限和最高限度。
4.精密度
精密度系指在規(guī)定的條件下，從同一個均勻樣品中，經(jīng)過多次取樣測定所得結(jié)果之間的接近程度。通常用相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD ）來表示。定量檢查的RSD 應(yīng)不得大于10%。
淋洗法和棉簽法用于限度檢查通常不需要做精密度實驗。5.準(zhǔn)確度
準(zhǔn)確度系指用該方法所獲得的檢驗結(jié)果與真實值之間的接近程度，表征了每種分析方法的正確性，一般以回收率（％）表示。對于設(shè)備清潔分析方法驗證，取清潔驗證方案中確定的棉簽法限度標(biāo)準(zhǔn)中的最低限度值（L 值）為依據(jù)，以20倍的L 值作為100%濃度標(biāo)準(zhǔn)點，分別配制120%，2.5%濃度溶液，平行制備及測定這三種溶液六次，計算回收率及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，即得。
三、結(jié)語
取樣方法的驗證，實際是對取樣人員的操作方法及清洗干凈設(shè)備殘留物轉(zhuǎn)移和溶出過程的全面考察。清潔分析方法驗證是證明采用的方法適合于相應(yīng)的檢測要求，是保證分析結(jié)果真實可靠的前提條件。從而遵循GMP 要求，有效的防止了交差污染。